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对含中药成分保健食品微生物检验方法的探讨

文档作者：刘冬玲，蒋波，陈奇知，杨美成文档来源：上海市食品药品检验		点击数：	更新时间： 2025年06月16日
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上一篇：对基层食品安全质检工作的思考

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第7卷第3期食品安全质量检测学报Vbl．7 NO．3
2016年3月Journal ofFood Safety and Quality Mar．，2016
对含中药成分保健食品微生物检验方法的探讨
刘冬玲，蒋波，陈奇知，杨美成+
(上海市食品药品检验所，上海201203)
摘要：目的分析含中药成分的保健食品进行微生物检验时所采用的菌落计数和控制菌检查方法的合理性。
方法根据GBl6740．2014《保健食品》中的微生物限量要求，结合《中国药典》附录中微生物限度检查法和
GB4789《食品微生物学检验》，对固态茶类和液态ISl服液类10批次含中药成分的保健食品进行了抑菌性筛查
及消除的方法学验证。结果对菌落计数采用常规法进行方法学验证时，筛查出3批供试品存在抑菌性：供试
品对菌落计数的抑菌性通过培养基稀释法不能完全消除，但可通过中和法消除；对控制菌检查采用常规法进
行方法学验证时，筛查出4批供试品存在抑菌性，供试品对控制菌金黄色葡萄球菌的抑菌性通过培养基稀释法
和中和法等均未能消除。结论建议采用含中和剂的琼脂培养基进行计数，并在试验中增加阳性对照菌株进行
监控，含中药成分保健食品的检验方法应参照《中国药典》进行方法学验证。
关键词：中药成分；保健食品；方法学验证；微生物检验
Discussion on the method of microbiological test for health foods including
Chinese herbal ingredients
LIU Dong-Ling，JIANG Bo，CHEN Qi—Zhi，YANG Mei．Cheng‘
(Shanghai Institutefor Food and Drug Control，Shanghai 201203，China)
ABSTRACT：Objective To analyze the rationality of the methods of colony counting and specified
micro-organisms in microbial tests for health foods including Chinese herbal ingredients．Methods
According to GBl6740—2014 Health food microbial limit requirements，Chinese Pharmacopoeia 2010
Append&amp;amp;microbial limit tests and GB4789 Food microbiological analysis，microbiological test methods of 1 0
kinds of health foods including Chinese herbal ingredients(tea in solid form and oral liquid)were validated．
Results During the methodology validation by conventional method，antibiotic effects of 3 samples on
microbial enumeration tests could be eliminated by neutralizing method rather than dilute method．However．
antibiotic effects of 4 samples on test of specified microorganism(Staph)，lococcus aureus)could not be
eliminated by the test methods．Conclusion Method of neutralizing agar medium is recommended in
microbial enumeration．The positive control strains are also added in the whole experimental process．More
reasonable methods which are set up to detect microbe in health foods including Chinese herbal ingredients by
reference to Chinese Pharmacopoeia should be validated．
KEY WORDS：Chinese herbal ingredients；health foods；method validation；microbiological test
+通讯作者：杨美成，博士，主任药师，主要研究方向为实验室质量管理、药物分析与微生物学检验。E-mail：yangmeicheng@vip．sina．tom
+Corresponding author：YANG Mei—Cheng，Ph．D，Chief Pharmacist，Shanghai Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201203，China．
E—mail：yangmeicheng@vip．sina．tom
万方数据
888 食品安全质量检测学报第7卷
1 引言
随着物质生活水平的提高，保健食品逐渐成为人
们尤其是中老年人群青睐的消费产品。不少保健食品
的保健功能是通过产品中含有的药食两用的中药成分
来实现的【11。中药成分即中药材，取自植物的根、茎、
叶、花、果实和动物或其脏器等。由于来源复杂，药材
原料中带有大量的微生物，易使含中药成分的保健食
品受微生物的污染[23】。另外，很多中药成分本身具有
抑菌作用，它们的存在可能会抑制微生物的生长进而
对检验结果产生影响卜1”。
现有保健食品微生物检验方法大多参照食品安全
国家标准GB 4789《食品微生物学检验》[8】。有研究表
明，保健食品检验时未经方法学验证，易造成检验结
果呈现假阴性【9。121。《中国药典》强调了方法学验证的
重要性，如建立某一药品的微生物限度检查法时，需
按照要求进行菌落计数和控制菌检查方法的验证，以
确认所采用的方法的适用性[13】。
本研究将药品方法学验证引入保健食品的微生物
学检验，选取了市场中较多、检测频率较高的固态茶类
和液态口服液类共10批次含中药成分的保健食品进行
试验。通过不同方法验证菌落计数和控制菌检查结果
的比较，探究含中药成分的保健食品微生物检验方法
的合理性，为完善保健食品的微生物学检验方法提供
理论依据。
2材料与方法
2．1材料和试剂
2．I．1材料
10批含中药成分的保健食品(所含主要中药成
分见表1)分别为固态茶类产品：碧生源减肥茶(批号：
4131001)，碧生源肠润茶(批号：1130103)，回春花牌
通秘茶(批号：131203)，东方保健茶(批号：130701)；
液态口服液类产品：无限极男仕口服液(批号：
13F05A01A)，血尔口服液(批号：KBl 15)，长兴牌参
茸口服液(批号：KSR581215)，太太美容口服液(批号：
TLJ0570)，无限极常欣卫口服液(批号：14D02806B)，
太太血乐ISl服液(批号：TAK0604)。
2．1．2培养基
血琼脂平板(批号：E0326Y)、7．5％氯化钠肉汤培
养基(批号：3302004)购自广东环凯微生物科技有限
公司；亚硫酸铋(BS)琼脂平板(批号：l 50508)购自上
海科玛嘉微生物技术有限公司；缓冲蛋白胨水(BPW，
批号：150420)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤(批
号：150320)、煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤(批号：150522)
购自上海盛思生化科技有限公司；平板计数琼脂培
养基(批号：150526)、0．85％生理盐水(批号：150526)、
孟加拉红培养基(批号：150526)、Baird．Parker平板(批
号：150527)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液(批号：
150526)、木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂(批号：
150526)为上海市食品药品检验所自配。
表1含中药成分的保健食品所含主要中药成分
Table 1 Chinese herbal ingredients in the tested health foods
万方数据
第3期刘冬玲，等：对含中药成分保健食品微生物检验方法的探讨889
2．1．3菌种
实验用菌种包括大肠埃希菌(Escherichia coli)
[CMCC(B)44 1 02]、金黄葡萄球(Staphylococcus
aureus)[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌(Bacillus
subtilis)[CMCC(B)63501]、A色念珠菌(Candida
albicans)[CMCC(F)98 001]、黑曲霉(Aspergillusniger)
[CMCC(F)98003】、乙型副伤寒沙门菌(Salmonella
paratyphi B)[CMCC(B)50 094]，均购自中国医学细
菌保藏中心。
2．2 实验方法
实验参照《中国药典》2010年版一部附录微生
物限度检查法和GB 4789食品安全国家标准《食品
微生物学检验》进行。
2．2．1 菌液制备
计数方法验证：将大肠埃希菌、金黄色葡萄球
菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉稀释成每1
mL含50～100 CFU试验菌的菌悬液。控制菌检查方
法验证：将金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠埃希菌稀
释成每1 mL含10～100 CFU试验菌的菌悬液。
2．2．2供试液制备
计数方法验证：固态茶类产品称取25 g至225
mL稀释液中，以1：10样品匀液为供试液；液态口服
液类产品以原液为供试液。
根据GB 16740．2014《保健食品》【14】微生物限量
表要求，检测金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠菌群。
控制菌检查方法验证金黄色葡萄球菌(或沙门氏菌)
检验时，取样品25 g(mL)iJH人225 mL 7．5％氯化钠肉
汤(或225 mL缓冲蛋白胨水)作为供试液；大肠菌群
计数，取样品25 g(mL)至225 mL稀释液中，制备成
1：10样品匀液，然后进行梯度稀释，固态产品选择
1：10的样品匀液为起始稀释度，液态产品选择原液
为起始稀释度。
2．2．3抑菌性筛查试验(常规法)
计数方法验证：试验组取制备好的供试液1 mL
和(50～100 CFU)试验菌1 mL，分别注入平皿中并倾
注琼脂培养基；试验组、菌液组和供试品对照组培养
后根据计数结果计算回收率，回收率应不低于70％，
判断为常规法适用。
控制菌检查方法验证：试验组分别直接添加
10～100 CFU的金黄色葡萄球菌、沙门菌和大肠埃希
菌至供试液中；试验组、阳性对照组和阴性对照组均
按相应控制菌检查法进行检查，试验组和阳性对照
组检测出试验菌，阴性对照组无菌生长，判断为常规
法适用。
2．2．4抑菌性消除试验f培养基稀释法、中和法和两
种方法联用1
经常规法验证，菌落计数回收率低于70％和控
制菌未能检出的供试品，可采用培养基稀释法和中
和法等消除供试品中的抑菌性，回收率的计算和控
制菌的检查步骤参照常规法。
培养基稀释法：计数方法验证时试验组取制备
好1 mL供试液等量分注5个平lm(o．2 mL／lⅡL)，每皿
加人1 mL(50～100 CFU)试验菌，计算每1 mL供试液
的平均菌落数；控制菌检查方法验证时，加大2．2．2
中增菌培养基的体积至975 mL。
中和法：选取聚山梨酯80和卵磷脂作为中和
剂[1 3,1 51，计数方法验证时将中和剂加入琼脂培养
基中；控制菌检查方法验证时，将中和剂加入增菌
培养基中。
3结果和讨论
3．1 筛查抑菌性的结果
3．1．1 菌落计数(常规法)
采用常规法对菌落计数进行2次独立的验证试
验，结果基本一致(见表2)。10批供试品中7批供试
品的试验菌回收率均高于70％，说明可采用常规法
进行菌落计数测定；2批固态茶类供试品碧生源减肥
茶和碧生源常润茶对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆
菌有较强的抑制作用，回收率均小于70％且接近o；1
批液态口服液供试品中对金黄色葡萄球菌有抑制作
用，其中1次试验的回收率小于70％，对枯草芽孢杆
菌有明显的抑制作用，回收率均小于70％且接近0，
说明采用常规法进行菌落计数不适用于这3批供试
品。固态茶类供试品和液态口服液类供试品中的中药
成分可能不同程度地对菌落计数产生抑菌作用。
3．1．2控制菌检查(常规法)
采用常规法对控制菌检查进行验证(见表3)，10
批供试品中6批液态口服液供试品检出了试验菌，说
明可采用常规法进行控制菌检查：4批固态茶类供试
品均无法检出金黄色葡萄球菌，说明对金黄色葡萄
球菌有较强的抑制作用，采用常规法进行金黄色葡
萄球菌检验不适用于这4批供试品。
万方数据
890 食品安全质量检测学报第7卷
表3控制菌的验证结果(常规法)
Table 3 Verification results of specified microorganisms(general method)
3．2抑菌性消除的结果
3．2．1 菌落计数(培养基稀释法和中和法)
常规法不适用的3批供试品采用培养基稀释法
(供试液0．2 mL／皿)和中和法(含0．1％卵磷脂和o．7％
聚山梨酯80的琼脂培养基)对敏感菌株金黄色葡萄
球菌和枯草芽孢杆菌分别进行验证试验(见表4)：碧
生源减肥茶和碧生源常润茶的敏感菌株回收率均高
于70％，说明两种方法能消除2批固态茶类供试品的
抑菌性；血尔口服液采用培养基稀释法后，枯草芽孢
杆菌的回收率仍低于70％，但采用中和法后金黄色
葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均高于70％，说
明中和法能消除血尔口服液的抑菌性。
3．2．2控制菌检查(培养基稀释法、中和法和两种方
法联用1
常规法不适用的4批供试品分别采用培养基稀
释法(7．5％氯化钠肉汤体积增至975 mL)、中和法1(含
0．1％卵磷脂和0．7％聚山梨酯80的225 mL7．5％氯化
钠肉汤)、中和法2(含0．3％卵磷脂、3％吐温80和0．1％
组氨酸的225 mL7．5％氯化钠肉汤)和培养基稀释法／
中和法2联用的方法(含0．3％卵磷脂、3％吐温80和
0．1％组氨酸的975 mL7．5％氯化钠肉汤)对敏感菌株
金黄色葡萄球菌分别进行了验证试验(见表5)：4批固
态茶类供试品仍无法检出金黄色葡萄球菌，说明这
几种方法均未能消除供试品对金黄色葡萄球菌的抑
菌作用。
万方数据
第3期刘冬玲，等：对含中药成分保健食品微生物检验方法的探讨89l
表4菌落计数的回收率(培养基稀释法和中和法％)
Table 4 Recovery of microbial enumeration tests(dilute method and neutralizing method％)
表5控制菌的验证结果(培养基稀释法、中和法等)
Table 5 Results of test for specified microorganisms(dilute method and neutralizing method，etc)
4结论
本研究通过对10批含中药成分保健食品抑菌性
筛查，结果表明固态茶类供试品和液态口服液类供
试品在菌落计数和控制菌检查时均存在抑菌性，抑
菌性可能与试验用产品成分中含决明子、番泻叶、黄
芪等中药成分有关【4_7】。根据方法学验证结果，建议
对含中药成分保健食品采用含中和剂(0．1％卵磷脂和
0．7％聚山梨酯80)的琼脂培养基进行计数。
本研究试验表明，含中药成分的保健食品微生
物检验结果存在假阴性的可能，建议在试验中增加
阳性对照菌株，同时不断完善保健食品微生物的检
验方法，从而为监管部门对保健食品相关企业的监
督提供技术支撑。
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(责任编辑：杨翠娜)
刘冬玲，主管技师，主要研究方向为
微生物学检验。
E·mail：13636358057@163．com
杨美成，博士，主任药师，主要研究方
向为实验室质量管理、药物分析与微生物学
检验。
E·mail：yangmeicheng@vip．sina．com

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